Qui trình thực hiện phản ứng huyết thanh phát hiện kháng thể kháng h.pylori
- Lấy 2ml máu của bệnh nhân cần xét nghiệm, chiết huyết
- Pha huyết thanh thành nhiều độ loãng từ 1/2… đến 1/1280 để tìm hiệu giá kháng thể.
- Mỗi độ loãng huyết thanh được nhỏ lên một tiêu bản đã phủ sẵn kháng nguyên pylory, ủ 370C/1h sau đó rửa trôi huyết thanh thừa.
- Nhỏ tiếp lên tiêu bản môt giọt cộng hợp kháng thể có thể gắn chất màu huỳnh quang ủ 370C trong 30 phút và rửa trôi chất màu thừa.
- Sấy khô nhẹ tiêu bản, phủ dung dịch đệm glycerol và soi trên kính hiển vi (KHV) huỳnh
Kết quả dương tính khi thấy hình vi khuẩn pylori phát sáng dưới KHV huỳnh quang.
Đáng giá: (+) ở hiệu giá kháng thể bao nhiêu?
Ghi lại bằng ảnh chụp huỳnh quang
Qui trình nuôi cấy phát hiện h.pylori từ mảnh sinh thiết dạ dày-tá tràng
Để đảm bảo khả năng phân lập cao, các bệnh nhân trước đó phải ngừng dùng kháng sinh ít nhất 1 tháng. Qui trình:
- Mảnh sinh thiết dạ dày (hang vị, thân vị, tiền môn vị, bờ cong bé, tá tràng, cạnh ổ loét; tốt nhất ở vùng hang vị và thân vị ) được lấy ra khỏi kìm sinh thiết bằng một que vô trùng, đặt ngay vào môi trường vận chuyển và gửi đến phòng nuôi cấy trong
- Tại phòng nuôi cấy, mảng sinh thiết được cấy lên môi trường chuyên biệt cho H.pylori, để 370C trong khí trường 5%O² , 10%CO² , 85%N³ . Sau 5-7 ngày nuôi cấy, các khuẩn lạc nghi ngờ H.pylori sẽ được kiểm tra các tính chất sinh vật-hoá học (oxidase, catalase và urease) để khẳng định và làm thuần khiết cho các nghiên cứu tiếp theo về kháng nguyên, kháng sinh đồ.
Qui trình thực hiện urease test
Mảnh sinh thiết vùng hang vị (hoặc thân vị) được cho ngay vào môi trường ure của test urease, đậy nắp lại và đặt vào tủ ấm 370C.
Đọc kết quả:
Nếu màu của môi trường chuyển ure chuyển từ màu vàng sang đỏ là thử nghiệm dương tính: trong mảng sinh thiết có H.pylori. Nếu màu môi trường vẫn giữ nguyên màu vàng là thử nghiệm âm tính.
Đánh giá:
(+++): Dương tính trong vòng 4h
(++): Dương tính trong vòng 4-8h (+): Dương tính trong vòng 12-24h
Qui trình làm tiêu bản nhuộm xác định hình thể h.pylori trực tiếp từ mảnh sinh thiết
Mảnh sinh thiết ổ loét dạ dày – tá tràng (hoặc hang vị, thân vị) được lấy ra khỏi kìm sinh thiết bằng một que vô trùng, dùng que vô trùng đó dàn mảnh sinh thiết lên một lam kính đã đánh dấu sẵn. Cố định lam kính bằng nhiệt đèn cồn, để nguội, nhuộm gram.
Đọc kết quả trên kính hiển vi ở độ phóng đại 1000x với 300 vi trường, tìm hình thể H.pylori và đánh giá mức độ
(+++): > 10 vi khuẩn/vi trường
(++): 5- 10 vi khuẩn/vi trường
(+): < 5 vi khuẩn/vi trường
Qui trình lấy bệnh phẩm cho xét nghiệm vi sinh vật chẩn đoán h.pylori (urease, nhuộm soi trực tiếp, nuôi cấy và chẩn đoán huyết thanh học)
1. Mảnh sinh thiết:
- Cần lấy 3 vị trí; hạng vị, thận vị và cạnh ổ loét (cách bờ ổ loét 0,5cm). Mỗi vị trí lấy tối thiểu 1 mảnh. Tổng số 3 mảnh.
- Sau mỗi bệnh nhân phải thay kìm sinh thiết hoặc rửa sạch bằng nước cất sau đó rửa lại cồn 700
2. Máu:
Dùng bơm kim tiêm vô trùng lấy 2ml máu tĩnh mạch cho vào ống nghiệm vô trùng không có chất chống đông, để đông tự nhiên và chiết huyết thanh.
